Ko te chromatography wai te tikanga matua mo te whakamatautau i nga ihirangi o ia waahanga me nga poke i roto i nga rawa mata, nga takawaenga, nga whakaritenga me nga taputapu kapi, engari he maha nga matū kaore he tikanga paerewa hei whakawhirinaki, na reira kaore e taea te whakawhanake i nga tikanga hou. I roto i te whakawhanaketanga o nga tikanga wahanga wai, ko te pou chromatographic te uho o te chromatography wai, na me pehea te whiriwhiri i tetahi pou chromatographic e tika ana he mea nui. I roto i tenei tuhinga, ka whakamaramatia e te kaituhi me pehea te whiriwhiri i tetahi pou chromatography wai mai i nga waahanga e toru: nga whakaaro whanui, nga whakaaro me te whānuitanga tono.
A.Whakaahua whakaaro mo te whiriwhiri i nga pou chromatography wai
1. Aromātaihia nga ahuatanga o te tinana me te matū o te wetewete: penei i te hanganga matū, te whakarewatanga, te pumau (pērā i te ngawari ki te whakapouri/whakaiti/hydrolyzed), te waikawa me te kawakore, me era atu, ina koa ko te hanganga matū te mea matua. he take ki te whakatau i nga ahuatanga, penei i te roopu whakakotahi he kaha te whakaurunga ultraviolet me te kaha o te rewharewha;
2. Whakatauhia te kaupapa o te tātari: ahakoa he nui te wehewehenga, teitei te pai o te poupou, te wa tātari poto, te tairongo teitei, te pehanga teitei, te roa o te noho pou, te utu iti, me etahi atu;
- Kōwhirihia he tīwae chromatographic e tika ana: kia mohio koe ki te hanganga, nga ahuatanga o te tinana me te matū o te whakakii chromatographic, penei i te rahi matūriki, te rahi o te pore, te whakamaaramatanga o te pāmahana, te pai o te pH, te urunga o te tātari, aha atu.
- Nga whakaaro mo te whiriwhiri i nga pou chromatography wai
Ka matapakihia e tenei upoko nga mea e whakaarohia ana ina whiriwhiria he pou chromatography mai i te tirohanga o nga ahuatanga o te tinana me te matū o te pou chromatography ake. 2.1 Pouaka whakakī
2.1.1 Matrix gel Ko te pouaka whakakī o te nuinga o nga pou chromatography wai ko te silica gel. Ko tenei momo whakakii he tino ma, he iti te utu, he kaha te miihini, he ngawari ki te whakarereke i nga roopu (penei i te hononga phenyl, te hononga amino, te hononga cyano, me etahi atu), engari he iti te uara pH me te awhe pāmahana e whakamanahia ana: te Ko te awhe pH o te nuinga o te nuinga o nga whakakī matrix gel silica ko te 2 ki te 8, engari ko te awhe pH o nga waahanga herea silica gel kua tino whakarereketia ka taea te whanui ki te 1.5 ki te 10, kei reira ano hoki nga waahanga herea silica gel kua whakarerekehia e mau ana i te pH iti, pērā i te Agilent ZORBAX RRHD stablebond-C18, he pūmau ki te pH 1 ki te 8; Ko te tepe pāmahana o runga o te matrix gel silica ko te tikanga 60 ℃, a ka taea e etahi pou chromatography te aro ki te pāmahana o te 40 ℃ i te pH teitei.
2.1.2 Polymer matrix Ko te nuinga o nga whakakī polymer he polystyrene-divinylbenzene, polymethacrylate ranei te nuinga. Ko o raatau painga ka taea e ratou te aro ki te whanui pH - ka taea te whakamahi i roto i te awhe o te 1 ki te 14, a ka kaha ake te atete ki nga wera teitei (ka eke ki runga ake i te 80 °C). Ka whakatauritea ki nga whakakii C18 i runga i te silica, he kaha ake te hydrophobicity o tenei momo whakakii, a he tino whai hua te polymer macroporous ki te wehe i nga tauira penei i te pūmua. Ko ona ngoikoretanga he iti ake te pai o te pou me te kaha o te miihini he ngoikore ake i tera o nga whakakii-a-silica. 2.2 Te hanga matūriki
Ko te nuinga o nga whakakī HPLC hou he matūriki porowhita, engari i etahi wa he matūriki kōhikohiko. Ka taea e nga matūriki porohita te whakaheke i te pehanga o te pou, teitei ake te pai o te pou, te pumau me te roa o te ora; i te wa e whakamahi ana i nga waahanga waea-nui (penei i te waikawa phosphoric) ranei i te wa e maataata ana te otinga tauira, he nui ake te waahanga mata motuhake o nga matūriki korikori, he pai ake ki te mahi katoa o nga waahanga e rua, he iti noa te utu. 2.3 Rahi matūriki
Ko te iti ake o te rahi o te matūriki, ka nui ake te pai o te pou me te teitei ake o te wehenga, engari ko te kino o te pehanga teitei. Ko te tīwae e whakamahia nuitia ana ko te tīwae rahi matūriki 5 μm; mehemea he tiketike te whakaritenga wehewehe, ka taea te whiriwhiri i te whakakii 1.5-3 μm, he pai ki te whakaoti i te raruraru wehenga o etahi tauira matrix matatini me nga waahanga maha. Ka taea e te UPLC te whakamahi i nga whakakii 1.5 μm; Ko te 10 μm nui ake ranei te rahi o te matūriki whakakī i te nuinga o te wā ka whakamahia mō ngā tīwae āhua-whakarite, whakareri rānei. 2.4 Te ihirangi waro
Ko te ihirangi waro e pa ana ki te wahanga o te wahanga here i runga i te mata o te silica gel, e pa ana ki te waahanga mata motuhake me te kapinga wahanga here. Ko te ihirangi waro teitei e whakarato ana i te kaha o te pou teitei me te taumira teitei, a he maha nga wa e whakamahia ana mo nga tauira matatini e hiahia ana kia nui te wehenga, engari na te roa o te wa taunekeneke i waenga i nga waahanga e rua, he roa te wa tātari; He poto ake te wa tātaritanga o nga pou chromatographic ihirangi waro iti, ka taea te whakaatu i nga momo whiriwhiringa, ka whakamahia mo nga tauira ngawari e hiahia ana kia tere te tātari me nga tauira e hiahia ana ki nga ahuatanga o te waa wai. Ko te tikanga, ko te ihirangi waro o C18 mai i te 7% ki te 19%. 2.5 Te rahi o te pore me te horahanga mata motuhake
He matūriki porous te pāpāho adsorption HPLC, a ko te nuinga o nga taunekeneke ka puta i roto i nga pores. Na reira, me uru nga ngota ngota ki roto i nga pores kia uruhia, kia wehea.
Ko te rahi o te pore me te horahanga mata motuhake e rua nga kaupapa taapiri. Ko te rahi o te pore he nui te waahanga mata motuhake, me te rereke. Ka taea e tetahi waahanga mata motuhake te whakanui ake i te taunekeneke i waenga i nga ngota ngota tauira me nga waahanga here, te whakarei ake i te pupuri, te whakanui i te uta tauira me te kaha o te pou, me te wehe i nga waahanga uaua. No tenei momo whakakii kapi katoa. Mo te hunga he nui nga whakaritenga wehewehe, ka tūtohu kia whiriwhiria nga whakakii me te waahanga mata motuhake nui; ka taea e te waahi mata motuhake te whakaiti i te pehanga o muri, te whakapai ake i te pai o te pou, me te whakaiti i te wa taurite, e tika ana mo te tātari rōnaki. No tenei momo whakakii anga-matua. I runga i te kaupapa o te whakarite i te wehenga, e taunaki ana kia kowhiria nga whakakii me nga waahanga mata motuhake mo te hunga e whai kiko ana te mahi tātari. 2.6 Te rōrahi pore me te kaha miihini
Ko te rōrahi pore, e kiia ana ko te “pore volume”, e pā ana ki te rahi o te rōrahi kore mo ia matūriki wae. Ka taea te whakaatu pai i te kaha miihini o te whakakii. Ko te kaha miihini o nga whakakii me te nui o te pore nui he iti ake te ngoikore atu i nga whakakii me te iti o te pore volume. Ko nga whakakii me te rahi o te pore iti iho i te rite ranei ki te 1.5 mL/g ka whakamahia te nuinga mo te wehenga HPLC, ko nga whakakii me te rahinga pore nui ake i te 1.5 mL/g ka whakamahia te nuinga mo te molecular exclusion chromatography me te iti-pressure chromatography. 2.7 Te reeti kapi
Ka taea e te kapi te whakaheke i nga tihi hiku na te taunekeneke i waenga i nga puhui me nga roopu silanol e kitea ana (pēnei i te hononga katote i waenga i nga pūhui kawakore me nga roopu silanol, nga kaha van der Waals me nga here hauwai i waenga i nga pūhui waikawa me nga roopu silanol), na reira ka pai ake te pai o te pou me te ahua o te tihi. . Ko nga wahanga here kaore i kapi ka whakaputa i nga whiriwhiringa rereke e pa ana ki nga waahanga here kua kapi, ina koa mo nga tauira polar.
- Te horahanga tono o nga momo pou chromatography wai
Ma tenei upoko e whakaatu te whānuitanga tono o nga momo pou chromatography wai i etahi keehi.
3.1 Wāhanga whakamuri C18 tīwae chromatographic
Ko te tīwae C18 te tīwae whakamuri-waahanga e whakamahia nuitia ana, ka taea te whakatutuki i te ihirangi me nga whakamatautau poke o te nuinga o nga matū waro, a ka pa ki nga matū reo-polar, polar ngoikore me nga matū kore-polar. Ko te momo me te tohu o te pou chromatographic C18 me whiriwhiri i runga i nga whakaritenga wehe motuhake. Hei tauira, mo nga matū he nui nga whakaritenga wehewehenga, 5 μm * 4.6 mm * 250 mm te nuinga o nga wa e whakamahia ana; mo nga matū he matrices wehewehe matatini me te polarity rite, ka taea te whakamahi 4 μm * 4.6 mm * 250 mm nga waahanga iti ake ranei. Hei tauira, i whakamahia e te kaituhi he pou 3 μm * 4.6 mm * 250 mm kia kitea e rua nga poke o te genotoxic i roto i te celecoxib API. Ko te wehenga o nga matū e rua ka eke ki te 2.9, he pai rawa atu. I tua atu, i raro i te kaupapa o te whakarite i te wehenga, ki te hiahiatia he tātari tere, ka tohua he pou poto 10 mm, 15 mm ranei. Hei tauira, i te wa i whakamahia ai e te kaituhi te LC-MS/MS ki te kite i te poke o te genotoxic i roto i te piperaquine phosphate API, i whakamahia he pou 3 μm * 2.1 mm * 100 mm. Ko te wehenga i waenga i te poke me te waahanga matua ko te 2.0, a ka taea te kite i tetahi tauira i roto i te 5 meneti. 3.2 Wāhanga whakamuri tīwae phenyl
Ko te tīwae Phenyl he momo tīwae whakamuri-wāhanga. He kaha te whiriwhiri o tenei momo pou mo nga puhui kakara. Mēnā he ngoikore te whakautu o ngā pūhui kakara i inehia e te tīwae C18 noa, ka taea e koe te whakaaro ki te whakakapi i te tīwae phenyl. Hei tauira, i te wa e hanga ana ahau i te celecoxib API, ko te whakautu waahanga matua i inehia e te pou phenyl o te kaihanga kotahi me te tohu rite tonu (katoa 5 μm * 4.6 mm * 250 mm) tata ki te 7 nga wa o te pou C18. 3.3 Tīwae wā-pūnoa
Hei tāpiringa whai hua ki te tīwae wā-whakamuri, e tika ana te tīwae wā-tika mō ngā pūhui tino polar. Mena kei te tino tere tonu te tihi i te wa e whakahekehia ana me te neke atu i te 90% te wahanga wai i roto i te waahanga whakamuri-waahanga, a tae noa ki te tata me te inaki ki te tihi whakarewa, ka taea e koe te whakaaro ki te whakakapi i te waahanga-waa noa. Kei roto i tenei momo tīwae he tīwae hilic, tīwae amino, tīwae cyano, aha atu.
3.3.1 Ko te pou Hilic Ko te pourangi Hilic te tikanga ka whakauru i nga roopu hydrophilic ki roto i te mekameka alkyl here hei whakarei ake i te urupare ki nga matū polar. He pai tenei momo pou mo te wetewete i nga matū huka. I whakamahia e te kaituhi tenei momo pou i te wa e mahi ana i nga ihirangi me nga matū e pa ana ki te xylose me ona hua. Ka taea hoki te wehe pai nga inemate o te xylose derivative;
3.3.2 Tiwae Amino me te pou cyano Ko te rarangi Amino me te pou cyano e titiro ana ki te whakaurunga o nga whakarereketanga amino me te cyano i te mutunga o te mekameka alkyl herea, hei whakapai ake i te whiriwhiringa mo nga matū motuhake: hei tauira, he pai te whiriwhiri i te pou amino. mo te wehenga o te huka, te waikawa amino, te turanga, me te amida; He pai ake te kowhiringa o te pou cyano i te wa e wehea ana nga matū rite te hanga hauwai me te hauwaikore na te mea he hononga hono. He maha nga wa ka taea te huri i te tiwae Amino me te pou cyano i waenga i te pou wahanga noa me te waahanga whakamuri, engari kaore i te tūtohutia kia huri auau. 3.4 Tīwae hau
Ko te pou chiral, e ai ki te ingoa, he pai mo te wehewehe me te tātaritanga o nga pūhui chiral, ina koa i roto i te mara o te rongoa. Ka taea te whakaaro ki tenei momo pou ina kore e taea e nga waahanga whakamuri tikanga me nga pou waa noa te wehe i te wehenga o nga isomer. Hei tauira, i whakamahia e te kaituhi he pou chiral 5 μm * 4.6 mm * 250 mm hei wehe i nga isomer e rua o te 1,2-diphenylethylenediamine: (1S, 2S) -1, 2-diphenylethylenediamine me (1R, 2R) -1, 2 -diphenylethylenediamine, me te wehenga i waenganui i nga mea e rua i tae ki te 2.0. Heoi, he nui ake te utu o nga pou taima i era atu momo pou, ko te tikanga 1W+/piece. Mēnā he hiahia mō ngā tīwae pēnei, me whakarite e te waeine he pūtea rawaka. 3.5 Tīwae whakawhiti katote
He pai nga pou whakawhiti katote mo te wehewehenga me te tātaritanga o nga katote kua utaina, penei i te katote, te pūmua, te waikawa nucleic, me etahi matū huka. E ai ki te momo whakakii, ka wehewehea ki nga pou whakawhiti cation, nga pou whakawhiti anion, me nga pou whakawhiti cation kaha.
Ko nga pou whakawhiti Cation kei roto i te konupūmā me te hauwai-a-wai, he pai te nuinga mo te tātari i nga matū cationic penei i te waikawa amino. Hei tauira, i whakamahia e te kaituhi nga pou e hangai ana i te konupūmā i te wā e tātari ana i te konupūmā gluconate me te konupūmā acetate i roto i te wairewa rewharewha. He kaha nga whakautu o nga matū e rua i te λ=210nm, ka eke te tohu wehenga ki te 3.0; i whakamahia e te kaituhi nga pou hauwai i te wa e tātari ana i nga matū e pa ana ki te huka. He maha nga matū nui e pa ana - maltose, maltotriose me te fructose - he teitei te tairongo i raro i nga puhoi rerekee, me te iti o te 0.5 ppm me te tohu wehenga o te 2.0-2.5.
He pai te nuinga o nga pou whakawhiti anion mo te wetewete i nga matū anion penei i te waikawa waro me nga katote halogen; Ko nga pou whakawhiti katote kaha he nui ake te kaha o te whakawhiti katote me te whiriwhiringa, he pai mo te wehenga me te tātaritanga o nga tauira uaua.
Ko te mea i runga ake nei he kupu whakataki ki nga momo me nga awhe tono o nga pou chromatography wai noa i honoa ki te wheako o te kaituhi. He momo motuhake ano o nga pou chromatographic i roto i nga tono tuturu, penei i nga pou chromatographic pore-nui, pou chromatography pore iti, pou chromatography affinity, pou chromatography multimode, pou chromatography wai tino tiketike (UHPLC), pou chromatography wai supercritical ( SFC), me etahi atu. He mahi nui ta ratou i roto i nga waahi rereke. Ko te momo motuhake o te pou chromatographic me whiriwhiri i runga i te hanganga me nga ahuatanga o te tauira, nga whakaritenga wehewehe me etahi atu kaupapa.
Wā tuku: Hune-14-2024